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为建立小麦种子高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)高通量检测方法,本研究改进了传统聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)中的样品制备和电泳分析方法,提高了检测效率。
具体方法为:在小麦种子无胚端切取其体积的1/4~1/5,置于单孔容积为200μL的96孔PCR扩增板中,并在每个微孔中放入1粒直径2 mm的钢珠,并加入浸泡缓冲液静置1~2 h,再加入提取缓冲液,经高通量研磨器(Retsch Tissue Lyser)研磨后,在60℃的烘箱静置30 min。
对微孔板离心和上清液预处理后在DYCZ-30C高通量垂直版电泳槽进行电泳分离,获得清晰的HMW-GS分离图谱。
该方法简易、快速、成本低,适用于小麦标记辅助选择和资源评价中的大规模HMW-GS组成的检测。
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